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RNA HS Assay Kit存放與使用技巧

更新時(shí)間:2025-04-27      點(diǎn)擊次數(shù):170
  一、RNA HS Assay Kit存放條件與注意事項(xiàng):
  1.溫度要求
  未開封試劑盒:存放在-20℃,避免反復(fù)凍融。
  已開封試劑盒:密封后可短期存放于4℃,建議1個(gè)月內(nèi)用完,避免活性成分降解。
  關(guān)鍵組分:若頻繁使用,可分裝后存于-20℃,減少凍融次數(shù)。
  2.防潮與避光
  試劑盒應(yīng)遠(yuǎn)離潮濕環(huán)境,避免吸濕導(dǎo)致粉末結(jié)塊或酶失活。
  避光保存熒光染料、底物等光敏成分,可用鋁箔紙包裹試劑盒或存放于暗盒中。
  3.防止污染
  開封后立即蓋緊管蓋,操作時(shí)避免說話、咳嗽等產(chǎn)生氣溶膠污染。
  使用前后擦拭操作臺(tái)和移液器,建議在超凈工作臺(tái)內(nèi)操作。
  二、RNA HS Assay Kit使用前準(zhǔn)備:
  1.試劑檢查
  離心確認(rèn):開蓋前輕柔離心,確保管壁殘留液體沉底。
  溶解沉淀:若試劑因運(yùn)輸出現(xiàn)結(jié)晶,需室溫緩慢溶解并混勻,避免高溫或超聲波破碎。
  有效期驗(yàn)證:檢查試劑瓶標(biāo)簽上的有效期和批次號(hào),過期或性狀異常的試劑勿用。
  2.實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化
  設(shè)置對(duì)照組:每次實(shí)驗(yàn)需包含無模板對(duì)照(NTC)、陽性對(duì)照(如標(biāo)準(zhǔn)品)和陰性對(duì)照(如水替代模板)。
  預(yù)混Master Mix:提前配制含熒光染料、酶、dNTP等的主混合液,漩渦振蕩混勻后短暫離心,減少分裝誤差。
  引物驗(yàn)證:新引物需通過梯度稀釋測(cè)試擴(kuò)增效率,避免非特異性擴(kuò)增或引物二聚體干擾。
  三、RNA HS Assay Kit操作技巧:
  1.加樣規(guī)范
  精準(zhǔn)移液:使用經(jīng)校準(zhǔn)的移液器,加樣時(shí)垂直插入液面下,避免氣泡產(chǎn)生。
  順序調(diào)整:最后加入模板RNA或反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物,減少交叉污染風(fēng)險(xiǎn)。
  預(yù)混震蕩:加樣后輕輕拍打管壁混勻,或使用低速渦旋儀。
  2.避免RNA降解
  冰上操作:全程在冰盒或低溫金屬板上操作,尤其是RNA模板和逆轉(zhuǎn)錄步驟。
  DNase處理:若RNA含痕量DNA,需用無核酸酶的DNase I處理,并徹*去除酶活性。
  使用RNA酶抑制劑:在反應(yīng)體系中添加RNase 抑制劑,尤其在樣本量低時(shí)。
  3.儀器設(shè)置
  熒光閾值調(diào)整:在指數(shù)擴(kuò)增期設(shè)定閾值,避免過高或過低。
  溫度校準(zhǔn):定期檢查PCR儀的溫控準(zhǔn)確性。
  多通道校正:若使用多通道熒光檢測(cè),需對(duì)各通道進(jìn)行交叉補(bǔ)償校準(zhǔn)。
 
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